公司名称：山东绿都生物科技有限公司

磺胺类（Sulfonamides）多残留 ELISA检测试剂盒说明书

产品编号：LD022

一、原理
　　本试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中磺胺类的残留量。
二、适用范围
　　定量检测组织、牛奶、蜂蜜样本中磺胺多残留药物的残留。
三、试剂盒特点及技术指标
 * 检 测 时 间 ： 60 min
   试剂盒灵敏度： 1 ppb(μg/kg)
 * 试剂盒检测纯阴性样本的背景值＜1 ppb
 * 样本处理方法更加简洁准确
序号 喹诺酮类药物 组织检测下限
1 磺胺甲恶唑 ≤4 ppb
2 磺胺嘧啶 ≤4 ppb
3 磺胺噻唑 ≤4 ppb
4 磺胺甲恶唑 ≤4 ppb
5 磺胺间甲氧嘧啶   ≤4 ppb
6 磺胺对甲氧嘧啶 ≤4 ppb
7 磺胺间二甲氧嘧啶 ≤6 ppb
8 磺胺氯哒嗪  ≤6 ppb
9 磺胺异恶唑 ≤4 ppb
10 磺胺苯吡啶 ≤4 ppb
   试剂盒检测样本的灵敏度：
 
 试剂盒准确度：
样本 回收率
动物组织 70 %-120 %
牛 奶 70 %-120 %
蜂 蜜 70 %-120 %




四、所需材料
仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、旋转蒸发仪/氮气吹干装置、均质器、振荡器、离心机、水浴锅、刻度移液管（10 mL）、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）
微量移液器：单道 1μL～10 μL、10 μL～100 μL
多道 50 μL～300 μL
试剂：乙腈、丙醇、氯化钠、氢氧化钠、去离子水。
五、 试剂盒组成
序号 组成部分 96T装量
1 磺胺类酶标板 12×8孔
2 磺胺类标准品工作浓度*6 6×1 mL
3 磺胺类高浓度标准品1 ppm 0.5 mL
4 磺胺类酶标物 13 mL
5 磺胺类抗体 7 mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 终 止 液 7 mL
9 10×浓缩洗涤液 40 mL
10 2×磺胺类样品稀释液 45 mL
*注：6个标准品浓度为：0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb, 81 ppb，直接使用。
六、 酶标免疫测定程序
将所需试剂从冷藏环境中取出，待其完全回  升至室温（20～25℃）后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
 按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
 加标准品/样品、抗体：加标准品/样品50μL 
到对应的微孔中，再加入磺胺类抗体50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30 min。
 洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，
加入洗涤工作液250 μL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
 加酶标物：加入磺胺类酶标物100 μL /孔， 
轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光反应30 min，甩干孔内液体，重复洗板3次，*后一次用吸水纸拍干。
 显色：加入底物液A液50 μL/孔，再加底物    
液B液50 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应15～20 min。
测定：加入终止液50 μL/孔，用酶标仪立即  测定450 nm处的吸光度值（建议用双波长450/630 nm）检测。
七、 结果判定
　　以标准品百分吸光率为纵坐标，以磺胺类标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中磺胺类实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）
八、 注意事项
① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。
② 反应终止液为2 M硫酸，避免接触皮肤。
③ 不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。
④ 0标准的吸光度（450/630 nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20 min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30 min，反之则减短反应时间。
九、贮藏条件及保存期
    贮藏条件： 2～8℃
保 质 期： 12个月