反相高效液相色谱柱C18保护柱
发布时间:05月15日
详细说明
简介
(1) 高纯度硅胶骨架,重金属含量< 5ppm,具有高表面覆盖率;
(2) 单功能高密度键合,LC-MS Q1检测无键合相泄漏,产品批次之间的差别小于1%;
(3) 理论塔板数大于80000/m,极佳峰形;
(4) 极高稳定性,在pH 2~8条件下连续运行20000床体积,保留时间,柱效及峰形变化极小;
(5) 部分封端,因此特别适合两性和酸性化合物分离分析。
特征
技术参数
范围
技术参数
范围
B型球形硅胶颗粒直径(um)
3 or 5
使用温度范围(℃)
≤70
孔径(Å)
120
键合密度(umol/m2)
3.4
表面积(m2/g)
300
硅烷泄漏*
无
重金属含量(ppm)
<5
USP Code
L1
使用pH值范围
2~8
100%水相条件下使用
不能
*LC-MS Q1测试
应用
中性、酸性、两性和部分碱性化合物在ZW&A C18上均能取得良好的分离。尤其适用于酸性及两性小分子化合物的分析。对于酸性和两性化合物,调流动相到pH 2~3左右质子化酸性官能团时可取得极佳峰形和良好分离。对于碱性化合物,调流动相到pH 1~3时可取得比较好的峰形。但在许多情况下,也可将流动相pH调至4~8甚至更高,以维持化合物稳定性或改变分离选择性。pH 4~8时推荐使用10~100mM缓冲盐溶液。对于峰明显拖尾的强碱性化合物,推荐添加10~20mM三乙胺或5~10mM二甲基辛胺改善峰形。这个时候特别推荐使用BetaBasic C18或TX产品。
柱性能
Innovation TM ZW&A C18色谱柱性能参数(柱效、拖尾因子、测试条件等)详见产品测试证书。
色谱柱安装和使用
旋下色谱柱两端柱头,按照色谱柱标签上液体流动方向将其连接于仪器。色谱柱不使用时,旋上两端柱头。
样品和流动相
为了避免堵塞色谱柱,样品和流动相使用前,须过0.45um滤膜、甚至孔径更小的滤膜。流动相为有机相和水相混合相,例如甲醇-水、乙腈-水。流动相脱气后方可使用。
操作注意点
承载溶剂:由于C18键合相为非极性相,因此,流动相*好为甲醇-水、乙腈-水等混合相。一般情况,随着有机相比例的增加,样品的保留时间会缩短。梯度洗脱时,10%甲醇或乙腈常作为初始流动相,100%甲醇或乙腈常作为终点流动相。需要说明的是,C18键合相可以与大多数有机相兼容。对于新的色谱柱,柱内含有甲醇(或乙腈)和水混合相,因此,用户初次使用的流动相中不能含有与之反应的成分。应首先用60%左右甲醇冲洗色谱柱,以除去色谱柱在包装和运输过程中引入的杂质。然后使用目标流动相。如果柱压或基线出现波动,说明柱内有气泡,此时,应打开排气阀,同时把流速调至更高,并维持2~5min,以除去气泡,例如,对于250×4.6mm色谱柱,可将流速调至3mL/min。
pH:推荐pH使用范围为2~8。
温度:如果流动相黏度较高,可采用升高柱温的办法以提高分离效率。虽然*高操作温度为70℃,但是,为了更长的使用寿命,建议*佳操作温度为<50℃,在温度高于70℃下连续使用,可能损坏色谱柱,尤其是在pH>8或pH<2条件下,对色谱柱损坏更大。
流速:对于5um 250×4.6mm色谱柱,标准流速为1mL/min。
柱保护:为了防止流动相或样品中的杂质,在色谱柱之前*好安装一个保护柱或预柱。通常情况下,预柱能阻止来自于样品、流动相、泵或进样器的杂质,对色谱柱起到保护作用。
或
储存
当色谱柱长时间不使用时,色谱柱应储存在100%甲醇或乙腈中。如果流动相中含有缓冲盐,使用后,须使用50%甲醇-水或50%乙腈-水冲洗30min~60min。再用100%甲醇或乙腈冲洗30min~60min,保存。为了防止色谱柱床风干,两端应旋上柱堵头。
胞内代谢物(糖酵解,戊糖磷酸途径和三羧酸循环) 离子对色谱分析(举例)
Innovation TM ZW&A C18特别适合酸性和两性小分子化合物分离分析(也适用于中性和弱碱性小分子化合物分离分析,也适用于多肽分离纯化,多肽分析,蛋白质肽图)。孔径:120Å;表面积:300m2/g;部分封端;pH适用范围1.5-8。详细的应用请参阅我们的产品手册。下面以胞内代谢物离子对色谱分析为例。
胞内代谢(糖酵解,戊糖磷酸途径和三羧酸循环)是生产许多重要的药物例如防止心脏病药物的*重要的途径。糖、磷酸糖、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、羧酸等的准确分析对揭示代谢途径有非常重要的意义。
Innovation TM ZW&A C18 5um 15cm x 2.1mm HPLC色谱柱可同时分析许多代谢产物。典型的LC-MS/MS MRM图在下:
流动相A: 10mM三正丁胺 (pH值用乙酸调整到pH5)
流动相B: 甲醇
电离模式: 负
梯度: 95%流动相A到10%流动相A (80 miniutes)