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微生物基本知识：β-半乳糖苷酶试验！

β-半乳糖苷酶试验

一、液体法（ONPG法）
⒈成分
邻硝基苯β-D-半乳糖苷(ONPG) 60.0 mg
0.01mol/L 磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10.0 mL
1%蛋白胨水(pH7.5) 30.0 mL
⒉制法
将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm 试管内，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。
⒊试验方法
自琼脂斜面挑取培养物一满环接种，于36 °C1 °C培养1 h~3 h和24 h观察结果。如果β-D-半乳糖苷酶产生，则于1 h~3 h变黄色，如无此酶则24 h不变色。

二、平板法（X-Gal法）
⒈成分
蛋白胨 20.0 g
氯化钠 3.0 g
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal) 200.0 mg
琼脂 15.0 g
蒸馏水 1 000.0 mL
pH 7.20.1
⒉制法
将上述各成分加热煮沸于1L水中，冷却至25 ℃左右校正pH至7.20.1，115 °C 高压灭菌10 min。倾注平板避光冷藏备用。
⒊试验方法
挑取琼脂斜面培养物接种于平板，划线和点种均可，于36 °C1 °C培养18h~24 h观察结果。如果β-D-半乳糖苷酶产生，则平板上培养物颜色变蓝色，如无此酶则培养物为无色或不透明色，培养48 h~72 h后有部分转为淡粉红色。

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