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多肽序列选择
发布时间:2020年08月07日
详细说明
1、序列中包含过多的疏水性氨基酸
一般来讲序列中有50%的疏水性氨基酸可大概判断为较难溶序列(较短的序列除外),更多的疏水性氨基酸不利于合成的粗品纯度提高,对于纯化的溶解制备都是较大的困难,一般需在纯度上沟通好。
2、重复序列
重复序列会造成合成困难,容易形成性质相近的残肽,从而在纯化时较难分离。
3、未知修饰
对于特殊修饰、客户提供特殊小分子等,即便是合成方法的理论可行,不代表实验一定成功,确定时需多做考虑,将可能问题体现讲清楚,避免不必要的纠纷。
4、长肽
所有的合成反应,效率都不能达到*对的100%,序列越长,产生的副反应和杂质也越多,正确率、收率都会大大降低,目前我们公司在长肽的合成积累了大量的经验,理论上尽量不要超过60aa长度,超过80aa长度的,考虑到合成难度、成本等,一般*还是采用生物合成。
5、磷酸化修饰
根据合成经验,3或4个的磷酸化修饰位点合成难度大大增加,更多的磷酸化成功率较低,一般只能做小量合成,合成周期、价格也会大幅提升,另外磷酸化修饰的位点不宜相近或相连,靠近序列的N端对降低合成难度有利。
6、多对二硫键成环
二硫键的环化会降低序列的溶解性,对于客户要求多对(3-4对)二硫键成环的序列多为天然序列,非天然序列会存在配对错误的可能,此为环化过程的难点,另外多对二硫键收率都较低,合成时间跟价格也会大幅提升。
7、首尾酰胺环
序列中氨基酸组合对首尾酰胺环的成功率影响较大,含Asp和Glu的序列可选择固相环化,成功率较高,对于液相首尾酰胺环,序列中含D型氨基酸有利于成环。
8、二肽或三肽的合成
短肽的合成往往收率较低,合成的困难在于裂解后,粗肽无法经乙醚析出,纯化的困难在于含95%TFA的裂解液不能直接应用于制备,另外短肽极性较大,较难吸附制备柱,造成合成和纯化的困难。
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